將Dox誘導(dǎo)外源基因表達(dá)系統(tǒng)和Cas9蛋白一起嵌入豬體內(nèi)，培育出了帶有升級(jí)版基因剪刀的工具豬。小分子藥物可對(duì)工具豬體內(nèi)的Cas9蛋白表達(dá)時(shí)間和表達(dá)劑量加以靈活調(diào)控，即Cas9表達(dá)由藥物施用與撤除而加以啟動(dòng)和關(guān)閉，而表達(dá)量受給藥劑量控制。誘導(dǎo)表達(dá)的剪刀蛋白Cas9不僅可以切割基因組，導(dǎo)致基因失活及染色體重排，還可以采用截短失活型sgRNA及轉(zhuǎn)錄激活蛋白組合，實(shí)現(xiàn)內(nèi)源靶標(biāo)基因的表達(dá)激活。

獲得的Dox誘導(dǎo)Cas9表達(dá)豬模型，將為直接進(jìn)行體內(nèi)基因編輯、體內(nèi)基因文庫(kù)篩選及體內(nèi)基因表達(dá)調(diào)控提供理想的工具。另外，在該工具基礎(chǔ)上，通過(guò)時(shí)空調(diào)控Cas9表達(dá)，建立了一步體細(xì)胞克隆法即可獲得能夠穩(wěn)定遺傳的時(shí)空特異性單或多基因敲除豬模型的策略，為后續(xù)構(gòu)建各種用途的新型條件性基因敲除豬模型提供了極大便利，也為細(xì)胞譜系示蹤模型構(gòu)建、基因治療過(guò)程中Cas9蛋白的安全性評(píng)估等研究提供理想的工具。

圖1 Dox誘導(dǎo)Cas9表達(dá)工具豬模型培育與應(yīng)用